Метод in vivo биотинилирования рекомбинантных белков вируса натуральной оспы
- Авторы: Никитин В.Н.1, Меркульева Ю.А.1, Щербаков Д.Н.1,2
-
Учреждения:
- Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора
- Алтайский государственный университет
- Выпуск: Том 60, № 5 (2024)
- Страницы: 552-560
- Раздел: Статьи
- URL: https://vestnikugrasu.org/0555-1099/article/view/681863
- DOI: https://doi.org/10.31857/S0555109924050132
- EDN: https://elibrary.ru/QSRSAL
- ID: 681863
Цитировать
Аннотация
В работе реализован метод специфического in vivo биотинилирования рекомбинантных белков M1 и B7 вируса натуральной оспы при биосинтезе в клетках СНО-К1. Для этого проводили коэкспрессию биотин-лигазы BirА и целевых генов, кодирующих эктодомены белков M1 и B7 с С-концевым avi-tag в клетках СНО-К1 в присутствии биотина в культуральной среде. Оптимальная концентрация биотина для экспрессии белков M1 и B7 составила 125 мкМ. Продукция биотинилированных рекомбинантных белков была осложнена низким выходом. Для повышения продукции целевых белков в культуральную среду добавляли низкомолекулярные энхансеры: лития ацетат, натрия вальпроат и кофеин. Энхансеры увеличивали продукцию целевого белка в 1.3–4.9 раза и не оказывали негативного влияли на выход биотинилированного белка. Наиболее высокий выход биотинилированного белка достигался при одновременном добавлении лития ацетата в концентрации 10 мМ и натрия вальпроата 2.5 мМ. Полученные таким образом белки могут быть использованы для сортировки специфических В-лимфоцитов.
Полный текст

Об авторах
В. Н. Никитин
Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора
Email: dnshcherbakov@gmail.com
Россия, р.п. Кольцово, 630559
Ю. А. Меркульева
Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора
Email: dnshcherbakov@gmail.com
Россия, р.п. Кольцово, 630559
Д. Н. Щербаков
Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора; Алтайский государственный университет
Автор, ответственный за переписку.
Email: dnshcherbakov@gmail.com
Россия, р.п. Кольцово, 630559; Барнаул, 656049
Список литературы
- Mendoza-Topaz C. // Methods Mol. Biol. 2020. V. 2169. P. 89–103.
- Habel J.E. // Methods Mol. Biol. 2021. V. 2261. P. 357–379.
- Suzuki Y., Kadomatsu K., Sakamoto K. // The Journal of Biochemistry. 2023. V. 173. № 6. P. 413–415. https://doi.org/10.1093/jb/mvad013
- De Boer E., Rodriguez P., Bonte E., Krijgsveldt J., Katsantoni E., Heckt A. et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 2003. V. 100. № 13. P. 7480–7485.
- Kido K., Yamanaka S., Nakano S., Motani K., Shinohara S., Nozawa A., et al. // Elife. 2020. V. 9. https://doi.org/10.7554/eLife.54983
- Kulyyassov A., Ramankulov Y., Ogryzko V. // Life. 2022. V. 12. № 2. P. 300. https://doi.org/10.3390/life12020300
- Wang Q., Wagner R.T., Cooney A.J. // PLoS One. 2013. V. 8. № 5. P. e63532. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0063532
- Roldán J.S., Cassola A., Castillo D.S. // Biotechnology Reports. 2020. V. 25. p. e00434. https://doi.org/10.1016/j.btre.2020.e00434
- Rahimi A., Karimipoor M., Mahdian R., Alipour A., Hosseini S., Mohammadi M. et al. // Iran J. Biotechnol. 2023. V. 21. № 2. e3388. https://doi.org/10.30498/ijb.2023.343428.3388
- Ghaderi D., Zhang M., Hurtado-Ziola N., Varki A. // Biotechnology & Genetic Engineering Reviews. 2013. V. 28. P. 147–176.
- Y ang W., Zhang J., Xiao Y., Li W., Wang T. // Front. Bioeng. Biotechnol. 2022. V. 10. P. 858478. https://doi.org/10.3389/fbioe.2022.858478
- Bhatwa A., Wang W., Hassan Y.I., Abraham N., Li X.Z., Zhou T.// Front. Bioeng. Biotechnol. 2021. V 9. https://doi.org/10.3389/fbioe.2021.630551
- Stuible M., Gervais C., Lord-Dufour S., Perret S., L’Abbé D., Schrag J. et al. // J. Biotechnol. 2021. V. 326. P. 21–27.
- Kusakabe T. // J. Pharmacol. Sci. 2023. V. 151. № 3. P. 156–161.
- Thoring L., Dondapati S.K., Stech M., Wüstenhagen D.A., Kubick S. // Scientific Reports. 2017. V. 7. № 1. P. 1–15.
- Iwasaki A. // Annu Rev Microbiol. 2012. V. 66. P. 177–196.
- Mojzesz M., Rakus K., Chadzinska M., Nakagami K., Biswas G., Sakai M. et al. // Int. J. Mol. Sciences. 2020. V. 21. № 19. P. 7289. https://doi.org/10.3390/ijms21197289
- Ha T.K., Kim Y.G., Lee G.M. // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2014. V. 98. № 22. P. 9239–9248.
- Yang W.C., Lu J., Nguyen N.B., Zhang A., Healy N.V., Kshirsagar R. et al. // Mol Biotechnol. 2014. V. 56. № 5. P. 421–428.
- Backliwal G., Hildinger M., Kuettel I., Delegrange F., Hacker D.L., Wurm F.M. // Biotechnol Bioeng. 2008. V. 101. № 1. P. 182–189.
- Avello V., Torres M., Vergara M., Berrios J., Valdez-Cruz N.A., Acevedo C. et al. // PLoS One. 2022. V. 17. № 11. P. e0277620. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0277620
- Ha T.K., Kim D., Kim C.L., Grav L.M., Lee G. M. // Biotechnol Adv. 2022. V 54. P. 107831. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2021.107831
- Патент Россия. 2020. RU2749459C1.
- Патент Россия. 2021. RU2752858C1.
- Dobson L.J., Saunderson S.C., Smith-Bell S.W.J., McLellan A.D. // Immunol Cell Biol. 2023. V 101. № 9. P. 847–856.
- Kupcsik L. // Methods Mol Biol. 2011. V. 740. P. 13–19.
- YekrangSafakar A., Mehrnezhad A., Wu T., Park K. // Biotechnol Bioeng. 2022. V. 119. № 6. P. 1498–1508.
- Hou X., Wei W., Fan Y., Zhang J., Zhu N., Hong H. et al. // Appl Microbiol Biotechnol. 2017. V. 101. № 13. P. 5259–5266.
- Gilchuk I., Gilchuk P., Sapparapu G., Lampley R., Singh V., Kose N. et al. // Cell. V. 167. № 3. P. 684–694.
- Kaever T., Meng X., Matho M. H., Schlossman A., Li S., Sela-Culang I. et al. // J Virol. 2014. V. 88. № 19. P. 11339–11355.
- Ivics Z., Hackett P.B., Plasterk R.H., Izsvák Z. // Cell. 1997. V. 91. № 4. P. 501–510.
- Niers J.M., Chen J.W., Weissleder R., Tannous B.A. // Anal Chem. 2011. V. 83. № 3. P. 994–999.
- Патент США. 2008. US8241870B2.
- Gräslund S., Savitsky P., Müller-Knapp S. // Methods Mol. Biol. 2017. V. 1586. P. 337–344.
- Petris G., Vecchi L., Bestagno M., Burrone O.R. // PLoS One. 2011. V. 6. № 8. P. e23712. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0023712.
- Predonzani A., Arnoldi F., López-Requena A., Burrone O.R. // BMC Biotechnol. 2008. V. 8. P. 41. https://doi.org/10.1186/1472-6750-8-41.
- Rubiyana Y., Damajanti Soejoedono R., Santoso A. // Indonesian Journal of Biotechnology. 2020. V. 25. № 1. P. 28. https://doi.org/10.22146/ijbiotech.52621.
- Wulhfard S., Baldi L., Hacker D.L., Wurm F. // Biotechnol. 2010. V. 148. № 2–3. P. 128–132.
- Fomina-Yadlin D., Mujacic M., Maggiora K., Quesnell G., Saleem R., McGrew J.T. // J. Biotechnol. 2015. V. 212. P. 106–115.
Дополнительные файлы
