Определение содержания кофактора FAD и NAD(P)H-оксидазных комплексов в спленоцитах мышей и клетках карциномы Льюис при апоптозе методом конфокальной микроскопии

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

В настоящей работе исследовано содержание кофактора FAD и ферментных NAD(P)H-оксидазных комплексов методами флуоресцентной и конфокальной микроскопии (с флуорофорами Annexin V–FITC, 7-AAD (7-Aminoactinomycin D), EtBr) при апоптозе, вызванном анфеном натрия в сочетании с пероксидом водорода в спленоцитах здоровых мышей и в опухолевых клетках карциномы Льюис. Применение этих методов дает возможность наблюдать и количественно оценить апоптотический эффект анфена натрия и пероксида водорода, а также позволяет визуализировать метаболитические изменения в клетке, усиление флуоросценции FAD в опухолевых клетках и NAD(P)H-оксидазных комплексов в спленоцитах. Полученные данные свидетельствуют о возможности применения анфена натрия в сочетании с пероксидом водорода в качестве противоопухолевого препарата, действующего на определенные типы клеток.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

Е. М. Миль

Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля Российской академии наук

Email: albantovaaa@mail.ru
Россия, Москва

А. А. Албантова

Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля Российской академии наук

Автор, ответственный за переписку.
Email: albantovaaa@mail.ru
Россия, Москва

Л. И. Матиенко

Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля Российской академии наук

Email: albantovaaa@mail.ru
Россия, Москва

А. Н. Голощапов

Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля Российской академии наук

Email: albantovaaa@mail.ru
Россия, Москва

М. А. Коровин

Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля Российской академии наук

Email: albantovaaa@mail.ru
Россия, Москва

В. В. Кувыркова

Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля Российской академии наук

Email: albantovaaa@mail.ru
Россия, Москва

Список литературы

  1. Beloborodova N.V. // General Reanimatology. 2019. V. 15. № 6. P. 62; doi::10.15360/1813-9779-2019-6-62-79
  2. Binyukov V.I., Mil E.M., Matienko L.I., Albantova A.A., Goloshchapov A.N. // Micro (MDPI). 2023. V. 3. № 2. P. 382; htpp//doi.org/10.3390/micro3020026
  3. Матиенко Л.И., Миль Е.М., Бинюков В.И. // Хим. физика. 2020. Т. 39. № 6. С. 87; doi: 10.31857/S0207401X20060084
  4. Mcintosh J.R. // J. Cell Biol. 2001. V. 153. No 6. P.25; doi: 10.1083/jcb.153.6.f25
  5. Захаров Н.С., Попова А.Н., Захаров Ю.А., Пугачёв В.М., Руссаков Д.М. // Хим. физика. 2022. Т. 41. № 7. С. 84; doi: 10.31857/S0207401X22070172
  6. Ткачук В.А., Тюрин-Кузьмин П.А., Белоусов В.В., Воротников А.В. // Биол. мембраны. 2012. Т. 29. № 1–2. С. 21.
  7. Русина И.Ф., Вепринцев Т.Л., Васильев Р.Ф. // Хим. физика. 2022. Т.41. № 2. С. 12; http://doi.org/10.31857/S0207401X22020108
  8. Герасимов Н.Ю., Неврова О.В., Жигачева И.В., Генерозова И.П..Голощапов А.Н. // Хим. физика. 2023. Т. 42. № 1. С. 22; doi: 10.31857/S0207401X23010041
  9. Садыков Р.А., Хурсан С.Л., Суханов А.А., Кучин А.В. // Хим. физика. 2023. T. 42. № 12. С. 3; doi: 10.31857/S0207401X23120099
  10. Миль Е.М., Бинюков В.И., Ерохин В.Н., Албантова А.А., Володькин А.А., Голощапов А.Н. // Цитология. 2020. Т. 62. № 7. С. 503; doi: 10.31857/S0041377120070032
  11. Ерохин В.Н., Кременцова А.В., Семенов В.А., Бурлакова Е.Б. // Изв. АН. Сер. биол. 2020. № 5. C. 583.
  12. Миль Е.М., Бинюков В.И., Ерохин В.Н. // Докл. АН. 2018. Т. 482. № 5. С. 598.
  13. Becker W. // J. Microsc. 2012. V. 247. No 2. P. 119; doi: 10.1111/j.1365-2818.2012.03618.x
  14. Druzkova I.N., Shirmanova M.V., Lukina M.M. et al. // Cell Cycle. 2016. V. 15. № 9. P. 1257; doi: 10.1080/15384101.2016.1160974
  15. Alen L-A.H. // Methods Molec. Biol. 2007. V. 412. P. 273; doi::10.1007/978-1-59745-467-4_18
  16. Rokutan K., Kawahara T., Kuwano Y. et al. // Antioxidants Redox Signaling. 2006. V. 8. № 9–10. P. 1573; doi::10.1089/ars.2006.8.1573
  17. Ma M.W., Wang J., Zhang Q. et al. // Mol. Neurodegeneration. 2017. № 12. P. 7; https://doi.org/10.1186/s13024-017-0150-7
  18. Lukina M. M., Dudenkova V. V., Ignatova N. I. et al. // Biochim. Biophys. Acta – Genetic Subj. 2018. V. 1862. № 8. P. 1693; doi: 10.1016/j.bbagen.2018.04.021
  19. Babkina А.S. // General Reanimatology. 2019. V. 15. № 6. P. 50; https://doi.org/10.15360/1813-9779-2019-6-50-61
  20. Vermot A., Petit-Härtlein I., Smith S.M.E., Fieschi F. // Antioxidants (Basel) 2021. V. 10. № 6: P. 890; doi: 10.3390/antiox10060890
  21. Bedard K., Krause K.H. // Physiol. Rev. 2007. V. 87. № 1. P. 245; doi::10.1152/physrev.00044.20

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать
2. Рис. 1. Флуоресценция FAD в спленоцитах мышей: единичное (слева) и множественное свечение (справа) в клетках при апоптозе.

Скачать (124KB)
Метаданные
3. Рис. 2. Микрофотографии спленоцитов при апоптозе, вызванном действием анфена натрия (10-4 М), и увеличенное в 6 раз изображение клетки (на мембране видны гранулы NAD(P)H-оксидазных ферментных комплексов NOX). Конфокальный микроскоп с увеличением 100х (флуорофор – Annexin V-FITC).

Скачать (204KB)
Метаданные
4. Рис. 3. Диаграмма содержания апоптозных клеток в культуре спленоцитов (флуорофор – AnnexinV-FITC) – 1, количество нежизнеспособных клеток (флуорофор EtBr) – 2. Изменение содержания клеток под действием пероксида водорода (5 мкМ), анфена натрия (10-4 М), и при их совместном воздействии.

Скачать (17KB)
Метаданные
5. Рис. 4. Процент клеток с флуоресценцией FAD – 1 и иммунофлуоресцией гранул NAD(P)H-оксидазных комплексов – 2 в культуре спленоцитов под действием пероксида водорода (5 мкМ), анфена натрия (10-4 М) и при их совместном воздействии.

Скачать (65KB)
Метаданные
6. Рис. 5. Микрофотографии нейтрофила в культуре спленоцитов, который находится в стадии нетоза – выброса сети ДНК, окруженной NAD(P)H-оксидазными комплексами – (флуорофор – AnnexinV-FITC(а) и 7AAD (б)). Конфокальный микроскоп с увеличением 100x.

Скачать (171KB)
Метаданные

© Российская академия наук, 2024